Geenipistoolin soveltaminen hedelmäkehitykseen

Kirsikka on hedelmä, joka on suhteellisen riippuvainen ilmastosta. Hedelmäkehityksen aikana sen kypsymistä säännellään abskishapolla (ABA).

Tässä tutkimuksessa viruksen indusoimaa geenin vaimentamista (VIGS) ja hiukkasten pommitusmenetelmää käytettiin identifioimaan neljä cDNA: ta, jotka koodaavat 8'-hydroksylaasia (avainentsyymi ABA: n oksidatiiviselle katabolismille) kirsikoissa. Deoksiribonukleiinihappo) Paccyp707a1-a4

Paccyp707a2 säätelee negatiivisesti kirsikkapuiden kypsymistä, ja paccyp707a1 välittää kuivuutta.

Viruksen indusoima geenihäiriö (VIGS) viittaa virukseen, joka tartuttaa kasvigeenin, jossa on kohdegeenifragmentti, joka voi indusoida endogeenisen geenin vaimennuksen, aiheuttaa fenotyyppisiä muutoksia ja sitten tutkia kohdegeenin toimintaa fenotyyppiseen vaihteluun perustuen.

Kuva 1. Muutokset ABA-biosynteesissä (pacnced1), ABA-katabolismissa (paccyp707as) ja ABA-sisältöön liittyvissä geeneissä kirsikkapuun kehittämisessä ja kypsymisessä. a) Absoluuttiset transkriptiotasot neljällä pacyp707: llä hedelmäkehityksen aikana. (b) PCnced1: n ja aba: n kehittyneet suhteelliset transkriptiotasot kehityksen aikana. Actinia käytettiin sisäisenä kontrollina ja sen ilmentymistä havaittiin qrt-pcr.

PAccyp707a-geenin ilmentyminen dehydraatioreaktiossa

32 päivästä kerätyt hedelmät jaettiin kahteen ryhmään ja vesihäviöaste oli 16% 45%: n suhteellisessa kosteudessa 3 päivän varastoinnin jälkeen alhaisissa suhteellisissa kosteuksissa (45%) ja korkeassa suhteellisessa kosteudessa (100%). ABA-pitoisuus ja pNCED1-transkriptiotaso hedelmissä olivat huomattavasti korkeammat kuin kontrolliryhmässä. Hän hallitsee (kuva 2). Sitä vastoin Paccyp707a1: n ilmentyminen säädettiin merkittävästi alas dehydraation jälkeen, ja Paccyp707a3: n ilmentyminen oli myös säädetty alaspäin, vaikkakin pienemmässä määrin, ja dehydraatio ei vaikuttanut Paccyp707a4: n ja Paccyp707a2: n ilmentymiseen (kuvio 2). Merkittävin muutos tapahtui paccyp707a1: n ilmentymisessä, joka voi olla tärkein kuivuusherkkä jäsen paccyp707a-geeniperheestä hedelmien kypsymisen aikana.

Paccyp707A2-geenin vaimennus edistää hedelmien värjäystä ja kypsymistä

Hedelmien fenotyypin käsitteli Paccyp707A1 / 2-RNAi. Kahdeksantoista päivänä kukinnan jälkeen valittiin 90 hedelmää kolmesta erillisestä hedelmätarhasta istutetusta kirsikkapuusta ja jaettiin kolmeen ryhmään, joista kukin oli 30, virus-indusoiduille geenihälytyskokeille.

Paccyp707a1-rnai, paccyp707a2-rnai ja kontroll trv-vektori (ilman cyp707a-geeniä) ruiskutettiin ryhmien 1, 2 ja 3 hedelmien pedikeleihin.

Hedelmät arvioitiin 7 päivää inokulaation jälkeen.

a) hedelmien käsittely (d) 28 päivää kukinnan jälkeen;

(b) 43d hedelmien hoitoon;

(c) hedelmien 43d trv-vektorihoito (ei cyp707a-geeniä);

(d) 43 d pacyp707a1 RNAi-käsiteltyjä hedelmiä;

e) hedelmien RNAi-käsittely, paccyp707a2;

(f) Paccyp707a2 RNAi-käsitelty hedelmä 6 päivää käsittelyn jälkeen (oikea säätö);

(g) paccyp707a1 RNAi 6 päivää hedelmäkäsittelyn jälkeen (oikealla puolella olevat hedelmät).