PCR-tekniikan periaate

Fluoreseiinillä leimattu Taqman-koetin sekoitetaan templaatti-DNA: n kanssa korkean lämpötilan denaturaation lämpöjakson loppuunsaattamiseksi, matalan lämpötilan renaturoitumisen, kohtalaisen lämpötilan laajenemisen ja polymeraasiketjureaktiosäännön noudattamiseksi. Taqman-koetin, joka on komplementaarinen templaatti-DNA: han, pilkotaan ja loistetaan. Pigmentti on vapaa reaktiojärjestelmässä ja säteilee fluoresenssia tietyissä valokäsittelyissä. Kun syklien määrä kasvaa, monistettu kohdegeenifragmentti kasvaa eksponentiaalisesti, ja fluoresenssisignaalin intensiteetti muuttuu vahvistuksen avulla mitattuna reaaliaikaisella ilmaisulla. Saadaan CT-arvo ja samanaikaisesti käyttämällä useita tunnettuja templaattikonsentraatioita standardina, testattavan näytteen geenin kopioluku voidaan saada.