Usein kysyttyjä kysymyksiä rikkoutuneet solut

1. E. coli ilmaisee vieraita proteiineja. Kun sonicated, se keskeytetään PBS, joka sisältää 1 % triton-X-100. Vaikutus ultraääni on parempi. Vaikutus 1 % triton-X-100 on edelleen ilmeisiä. Muut bakteerit myös toimi, kuten Streptomyces. Jälkeen ilmaista yhdistelmä proteiinia soluja olisi häirinnyt ultraääni solun häiriö, käyttämällä jäähauteeseen 400w, ja murskaa 1s, 2s, mutta paljon vaahtoa tuotettiin vähän aikaa vaikuttaa murskaus valtaa. Pbs ja tris puskurit oli näin. On epätäydellinen hajanaisuus ja target-proteiini on ehjä solut, mitä tehdä?

Analyysi: Kupla luodaan koska anturi-asema ei ole sijoitettu. keräysputken on oltava lähellä pohjaa noin 0,5-1 cm; teho vaihtelee väline, mutta nesteen taso on havaittavissa, on vaihtelu mutta ei liian voimakas; Voit valita ultraääni solujen murskaimen rikki 3s 10s ja rikki 20 - 30 kertaa. Sarvi kanta on huomattava. Jos ääni on väärä, se olisi mukautettava ajoissa; koska bakteerien pitoisuus. Yrittää lisätä äänenvoimakkuutta, kun murskaus, Zui vahvuus ei saa ylittää 60 prosenttia. Yritä rikkoa 8s 8s, bakteeri proteiineja, on vaikea purkaa proteiini aiheuttaa proteiiniendenaturaatio tuottaa kuplia, jonka voi keskeyttää vähän pidempään. Proteiini sisällyttämistä elinten muodossa.

2. millä edellytyksillä ultraäänellä Streptomyces (actinomycetes)?

Analyyttinen: actinomycetes kuuluvat (G + C) molaarinen prosenttiyksikköä (mol %) Gram-positiivisia (Eubacteria) aluevaltaus ryhmän Fylogeneettinen puussa prokaryoottisten järjestelmä, joka on ainutlaatuinen prokaryooteissa molekyyli ja biologiset ominaisuudet. Kuitenkin eri ryhmien soluseinä koostumus vaihtelee suuresti. E. coli-ultrassa 400W käytetään, ja rikkoa 5s 5s menetelmä on tehokas, mutta sitä käytetään Streptomyces ja sillä ei ole vaikutusta ero soluseinän koostumus. Ennen kehruuta hoidossa Streptomyces (actinomycetes) on yleensä määritetty pitoisuus bakteerisuspensio. Erityisedellytyksiä murskaus käyttää ultraääni solun haitta: kerää bakteereja 24 h kulttuuri-liuoksessa 5 000 r / min 5 min kerätä soluja. pesun pH 7,5 Na2HPO-NaH2PO puskurin 3 kertaa ja sitten solut on muotoiltu osaksi 1:3 bakteerisuspensio käyttäen puskuria. Sijoitetaan 40 mL suuri muovinen koeputkeen. Aseta suuri muovinen koeputkeen jäähauteeseen ja murskata sen ultraääni solun aineiden (teho 200W, 1/2 ”probe murskata 30s, ajoittainen 30s); murskaus ratkaisu 12 000 r/min sentrifugoidaan suurella nopeudella 30 min, kerätä solu roskat ja supernatantti. Pese solut voidaan myös pestä kerran valmiiksi jäähtynyt suolaliuoksella tai Tris-HCL: ää pH 8. Lisäksi ultraääni annos vaihtelee suuresti näyte ja bakteerien määrä. Voima voi olla 400-600w, murskattu 5s pysäyttää 5s, ice Kylpyamme ja 1 mM PMSF lopullisen pitoisuuden on lisätty. Määrittämiseksi tarvittavat ultraääni intensiteetti ja taajuus on tarpeen tarkistaa, ovatko bakteerit ovat täysin rikki milloin tahansa.